Серологические методы лабораторной диагностики сифилиса. Экспресс-тест на сифилис: достоинства диагностики, показания, как подготовиться и показания к проведению Экспресс диагностика сифилиса

Сифилис многолик. Инфекция, попадая в организм, оставляет следы не только на кожных покровах и половых органах, но и разрушает нервную систему, опорно-двигательный аппарат, легкие, ухудшает слух и зрение. Несмотря на широкий спектр симптомов и вариантов их сочетаний, медики научились выявлять болезнь и безошибочно указывать стадию ее развития.

Общество желает защититься от заражения бледной трепонемой. А потому предусмотрен ряд экспресс-тестов для ранней диагностики сифилиса или выявления носителей инфекции. Правилом стал забор крови на лабораторную диагностику:

• в случаях беременности;
• перед операцией;
• у доноров перед сдачей крови или органов для трансплантации;
• у медицинских работников, учителей, воспитателей, работников сферы общественного питания и др.;
• у военнослужащих;
• у заключенных.

Лабораторный тест и клиническое обследование на сифилис проведут для:

• пациентов с признаками ЗППП;
• половых партнеров и других членов семьи человека с установленным диагнозом «сифилис»;
• младенцев, родившихся от больной матери;
• всех, у кого установлен диагноз другой болезни, передающейся половым путем;
• проверки эффективности терапевтического метода в ходе лечения;
• всех, у кого скрининг дал положительный результат.

Порядок обнаружения инфекции на приеме у венеролога

Из разговора с пациентом врач выясняет:

• есть ли подтвержденный диагноз «сифилис» у партнера;
• случались ли ранее высыпания на половых органах;
• воспалялись ли лимфатические узлы;
• имел ли место незащищенный секс 3-4 недели назад.

В ходе клинического осмотра кожи, половых органов, ануса, слизистых оболочек специалист выясняет схожесть высыпаний и других поражений кожи с теми, что характерны для сифилиса. Тщательно пальпируются периферические лимфоузлы для оценки степени их увеличения.

В случаях наличия сифилид (твердого шанкра, розеол, папул, гранулем) доктор назначает гистоморфологическое исследование. В лаборатории описывают внешний вид и изучают содержимое образования. По результатам судят о стадии заболевания.

Решающий вклад в диагностику сифилиса вносит лабораторный метод выявления возбудителя или следов иммунного ответа на заражение.

Диагноз устанавливают исходя из совокупности данных, полученных после клинического обследования и лабораторных тестов. В исключительных случаях, когда невозможно провести анализы, лечение назначают на основе осмотра.

Диагностика осложнений

Вторичный и третичный сифилис могут давать осложнения, называемые специфическими висцеритами. В процесс могут включаться все органы и системы, но чаще всего венерологи наблюдают поражения:

• печени;
• нервной системы;
• костей;
• сердца.

Особенно опасен сифилис для беременных женщин. Кроме осложненной беременности не исключено внутриутробное или вертикальное (в родовых путях) заражение плода, мертворождение.

Важно вовремя диагностировать не только инфекцию, но и вторичные заболевания. С этой целью кроме специфических тестов и общих анализов мочи и крови проводятся дополнительные обследования (Таблица).

Лабораторные анализы биологических материалов

Лабораторная диагностика сифилиса стала развиваться с 1905 года, когда был обнаружен возбудитель заболевания – бледная трепонема. До этого содержимым сифилид заражали кроликов, которые стопроцентно чувствительны к инфекции. Уже в 1906 году Вассерманом была разработана первая серологическая реакция на сифилис (RW). В 1949 году медицина предложила более специфичную реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), но RW не вытеснена из лабораторий до сегодняшнего дня.

На смену первым анализам приходят современные методы диагностики. Они отличаются по технике проведения и предназначению. В списке актуальных тестов:

• темнопольная микроскопия – предусматривает изучение мазка или соскоба для обнаружения трепонемы в исследуемом субстрате (в быту данное исследование иногда называют «мазок на сифилис»);
• молекулярно-биологические методы выявления специфической ДНК (полимеразная цепная реакция, ДНК-зондирование);
• серологическая диагностика сифилиса по сыворотке крови или спинномозговой жидкости.

Темнопольная микроскопия

Из очагов поражения берут пробы для микроскопического исследования на бледную трепонему. Объектами тестирования являются:

• содержимое сифилид;
• тканевая жидкость;
• ликвор;
• амниотическая жидкость;
• ткань пуповины.

Трепонема получила характеристику «бледная» благодаря устойчивости к действию большинства красителей. Живой микроб хорошо виден в темном поле со специальной подсветкой. Лаборант обращает внимание на морфологические признаки бактерий и наблюдает за характером их движения.

Для гистоморфологического исследования пробы окрашивают серебром (по Морозову) или по Романовскому-Гимзе.

Прямые методы микроскопии применяют для диагностики врожденного заболевания или поздних стадий сифилиса. Проверить его правильность можно прямой реакцией иммунофлюоресценции (РИФ-Тр) или полимеразной цепной реакцией (ПЦР). В первом случае выявить возбудителя помогают противотрепонемные антитела и флюоресцирующий краситель, а во втором – молекулы ДНК бледной трепонемы.

Поиск ДНК возбудителя

Даже единственную молекулу ДНК трепонемы можно обнаружить при анализе крови. Успехи в данной области стали возможными с 1991 года, когда был изобретен тест полимеразной цепной реакции (ПЦР). Носитель наследственной информации размножают в специальных температурных условиях и многократно копируют ферментом – ДНК-полимеразой. После, методом электрофореза, выявляются искомые фрагменты цепи.

Это вполне точный и специфичный тест. За рубежом он стал золотым стандартом диагностики сифилиса. В России ПЦР пока скорее исследовательский, чем клинический.

Другим способом выявляют трепонемы при ДНК-зондировании (гибридизации нуклеиновых кислот). В этом случае денатурированную ДНК соединяют со специфическим зондом. Изменение цвета фильтра, на который нанесены пробы, свидетельствует о заражении.

Серологические способы диагностики

Для различных целей диагностики могут использоваться серологические нетрепонемные и трепонемные тесты. В ходе анализа выявляют антитела к бледной трепонеме в крови.

В качестве экспресс-диагностики или скрининга рекомендуют обращаться к следующим нетрепонемным тестам:

• RPR – тесту быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins);
• RST – тесту отбора реагинов (Reagin Screen Test);
• TRUST – тесту с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой (Toluidin Red Unheated Serum Test);
• USR – тесту определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins);
• VDRL – лаборатории изучения венерических заболеваний (Venereal Disease Research Laboratory);
• микрореакции преципитации (МРП) с плазмой или инактивированной сывороткой;
• реакции связывания комплемента (РСК) и ее разновидности с кардиолипиновым антигеном (РСКк).

В основе методики – поиск антител (IgM и IgG) к липидам поврежденных клеток и липопротеинам мембран возбудителя. Положительный ответ названные анализы показывают уже через неделю после появления первых сифилид.

Антитела собственно к трепонеме выявляют методами:

• ELISA – иммуноферментного анализа – ИФА (Enzymelynked immunosorbent assay);
• FTA – реакции иммунофлюоресценции – РИФ (Fluorescent treponemal antibody);
• RW – реакции связывания комплемента (реакция Вассермана);
• RW с трепонемным антигеном – РСКт;
• TPHA – реакции пассивной гемагглютинации – РПГА (Treponema pallidum haemagglutination assay);
• TPI – реакции иммобилизации бледных трепонем – РИБТ или РИТ (Treponema pallidum immobilization test);
• Western Blot – иммуноблотинга.

Венерологи следуют определенному порядку проведения серологических тестов. В качестве экспресс-диагностики проводят один из нетрепонемных анализов. Учитывается низкая чувствительность в ранней и поздней стадиях инфицирования. Поэтому как отрицательные, так и положительные ответы при определенной клинической картине должны быть перепроверены трепонемными методами.

В разных жизненных ситуациях могут наблюдаться сочетания положительных и отрицательных ответов. Расшифровать их поможет таблица.

Окончательные выводы делает венеролог на основании комплекса данных: клинической картины, гистологических и лабораторных исследований.

Источники:

1. Аковбян В.А., Прохоренков В.И., Новиков А.И., Гузей Т.Н. // Сифилис: иллюстр. рук-во (ред. В.И. Прохоренков). – М.: Медкнига, 2002. – С. 194-201.
2. Дмитриев Г.А., Фриго Н.В. // Сифилис. Дифференциальный клинико-лабораторный диагноз. – М.: Мед. книга, 2004. – С. 26-45.
3. Лосева О.К., Ловенецкий А.Н. Эпидемиология, клиника, диагностика и лечение сифилиса: рук-во для врачей. – М., 2000.
4. Панкратов В.Г., Панкратов О.В., Навроцкий А.Л. и др. // Рецепт (приложение: Междунар. науч.-практ. конф. «Современные подходы к диагностике, лечению и профилактике инфекций, передаваемых половым путем», Гродно, 2005). – 2005. – С. 165-169.
5. Панкратов В.Г., Панкратов О.В. // Современные возможности лабораторной диагностики сифилиса и трактовка результатов исследования. – Минск, Белорусская медицинская академия последипломного образования, 2006.
6. Панкратов В.Г., Панкратов О.В., Крукович А.А. и др. // Здравоохранение. – 2006. – № 6. – С. 35-39.
7. Родионов А.Н. // Сифилис: рук-во для врачей. – СПб.: Питер, 1997. – С. 226-245.
8. Хурадо Р.Л. // ЗППП. – 1997. – № 3. – С. 3-10.
9. Шмидт Б.Л. // Первый Российский конгресс дерматовенерологов: тез. науч. работ. – СПб., 2003.– Т. II. – С. 40-41.
10. Romanowski B., Sutherland R., Flick G.H. et al. // Ann. Med. –1991. – V. 114. – P. 1005-1009.

Содержание статьи

Лабораторная диагностика сифилиса

В последнее десятилетие в лабораторной диагностике сифилиса произошли значительные изменения. Такие классические тесты, как реакция связывания комплемента (реакция Вассермана), реакция Кана, цитохолевая и другие реакции преципитации утратили свою актуальность вследствие недостаточной чувствительности и большого количества неспецифических результатов. Вместо них используются во много раз более чувствительные и специфичные тесты. Внедрены молекулярно-биологические ДНК- и РНК-тесты. При интерпретации результатов тестирования используется компьютерный анализ, что исключает их субъективную оценку. Тестирование автоматизировано, методы стандартизированы, разработаны и сертифицированы различные диагностические комплексы. Это открывает широкие возможности для диагностики сложнейших случаев заболевания. В диагностике сифилиса используются:
1. Бактериоскопия.
2. Методы серологического исследования (неспецифические и специфические).
3. Исследование спинномозговой жидкости (СМЖ).
4. Гистологическое исследование - преимущественно в стадии третичного сифилиса.
5. Бактериоскопическое исследование.
6. Микроскопическое исследование нативного препарата отделяемого эрозивных или язвенных высыпаний или пунктата из лимфоузла для выявления Treponema pallidum.

Бактериоскопический метод

Получение материала и подготовка к исследованию
Материал со слизистых оболочек, кожи половых органов или экстрагенитальной области с подозрительными эрозивными или язвенными дефектами, непосредственно с поверхности твердого шанкра, широкой кондиломы, эрозивных папул получает врач лаборатории или любой другой врач в помещении, где подготовлен микроскоп с темным полем зрения. Поверхность ulcus durum или эрозивных папул протирается тампоном, смоченным в физиологическом растворе, и затем раздражается бактериологической платиновой или вольфрамовой петлей несколько минут, пока из глубоких слоев не покажется прозрачная тканевая жидкость. Необходимо следить, чтобы к ней не примешивалась кровь, в противном случае это затруднит исследование. Полученная жидкость переносится петлей на предметное стекло, куда при необходимости можно добавить физиологический раствор. Подготовленный препарат исследуется в темном поле микроскопа. Если результат негативный, исследование повторяется несколько дней подряд, а в промежутках между исследованиями применяются аппликации с физиологическим раствором.
Перед микроскопическим исследованием нельзя использовать антибиотики и местные антисептические средства!
Исследование
Полученный материал с каплей физиологического раствора, помещенный на предметное стекло и накрытый покровным стеклом, исследуется под микроскопом с помощью объектива с 40-кратным увеличением и окуляра с 10-кратным увеличением. Для микроскопического подтверждения диагноза необходимо обнаружить, по крайней мере, 2-3 морфологически типичные, живые трепонемы с характерными движениями. Отрицательный результат не исключает вероятность заболевания сифилисом, поэтому исследование необходимо повторить несколько раз. Употребление пациентом антибиотиков или местных антисептических средств является важным моментом в анамнезе.
Клиническое значение
Диагноз первичного серонегативного сифилиса может быть подтвержден только при наличии бледных трепонем. У пациентов с приобретенным или с врожденным сифилисом трепонемы обнаруживаются во всех сифилидах как раннего, так и позднего сифилиса. Интенсивность тканевой реакции обратно пропорциональна количеству этих микроорганизмов, наибольшее количество которых находится в первичной сифиломе (твердый шанкр), в региональных лимфоузлах и папулах вторичного свежего сифилиса, а наименьшее - в поздних сифилидах. У пациентов с вторичным сифилисом бледные трепонемы могут обнаруживаться во всех органах.
В циркулирующей крови трепонемы могут присутствовать кратковременно только у пациентов с вторичным свежим сифилисом и ранним врожденным сифилисом. Кровь является неблагоприятной средой для трепонем, которую они быстро покидают, мигрируя в ткани. Чрезвычайно трудно обнаружить трепонемы в цереброспинальной жидкости даже у пациентов с tabes dorsalis и прогрессивным параличом. Сперма человека является инфекционной. Моча, пот, слюна не являются контагиозными, если они не соприкасаются с мокнущими высыпаниями. Напротив, в молоке матери трепонемы обнаруживаются. У больных сифилисом трепонемы можно выявить в пунктате лимфоузлов, в селезенке и в неспецифических повреждениях (в экссудате полостных элементов различного происхождения, например, в пузырьках herpes simplex). Метод характеризуется низкой себестоимостью, ответ можно получить в течение получаса.
Возможные ошибки
Для быстрой диагностики сифилиса важно, чтобы больной не занимался самолечением. Если поверхность шанкра, кондиломы или эрозивной папулы покрыта корочкой, образовавшейся в результате вторичного инфицирования, ее следует очистить с помощью физраствора.
Раздражение поверхности элемента с целью получения тканевой жидкости необходимо выполнять очень осторожно, чтобы не вызвать кровотечение, поскольку наличие эритроцитов в микропрепарате затрудняет качественную диагностику. Исследование считается положительным только при обнаружении морфологически типичных трепонем с наличием, по крайней мере, 8 завитков и характерными движениями. Treponema pallidum необходимо дифференцировать с Т. refringens, Т. balantidis, Т. phagadenis, Т. gracilis, Т. macrodentinum, T.microdentinim.

Серодиагностика сифилиса

В выявлении и подтверждении диагноза сифилиса, особенно в случае поздних и латентных форм заболевания, когда клинические проявления ничтожны или отсутствуют, решающее значение отдается серологическим методам диагностики. Отмечены случаи, когда о заболевании сифилисом свидетельствуют только полученные специфические положительные результаты тестирования при исследовании сыворотки или плазмы.

Неспецифические (нетрепонемные) тесты

К неспецифическим (нетрепонемным) тестам, являющимся методами экспресс-диагностики сифилиса, относятся RPR (Rapid Plasma Reagins), тест с инактивированной сывороткой - МРП (микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном) и их модификации. Это так называемые флокуляционные тесты, где сформировавшийся в ходе реакции комплекс «антиген + антитело» образует хлопья, которые различимы при помощи лупы. Во всех указанных тестах в качестве антигена используется кардиолипиновый антиген, полученный из сердечной мышцы быка и не имеющий никакой связи с антигенами возбудителя сифилиса Treponema pallidum.
В диагностике сифилиса нетрепонемные тесты используются в качестве скрининговых (отборочных) и не подходят для подтверждения диагноза сифилиса. Такие тесты применяются для обследования больших групп населения во время профилактических осмотров или в эпидемиологически неблагоприятной ситуации. Тесты достаточно чувствительны, технически просты, однако требуют специально обученного персонала. Результаты тестирования должен оценивать и подтверждать врач. Для экспресс-диагностики используются преимущественно серологические тесты МРП и RPR. Чувствительность нетрепонемных тестов при ранних формах сифилиса составляет приблизительно 70%, в случае вторичного сифилиса - 100%, при латентных формах - 30%. Неспецифические тесты могут давать ложноположительные результаты в 2-2,8% случаев. У отдельных категорий пациентов, например, у беременных, это число может увеличиваться до 3-3,5%. МРП и RPR становятся позитивными через 1 -4 недели после появления шанкра, то есть через 1-1,5 месяца после инфицирования. Примерно в 2% случаев наблюдается так называемый феномен «прозоны», когда на фоне выраженной клинической картины сифилиса и положительных результатов специфических серологических реакций RPR могут не давать положительных результатов. В таких случаях положительный результат получают, разбавив образец сыворотки. При обследовании беременных, доноров, пациентов отоларингологического, неврологического и психоневрологического отделений, нетрепонемные тесты обязательно применяются в комплексе со специфическим диагностическим тестом (РПГА, ИФА).
Количественные методы (определение титра антител) МРП и RPR используются для контроля эффективности лечения.
Принцип МРП
При соединении эмульсии кардиолипинового антигена с плазмой или сывороткой больного сифилисом образуется флокулят (комплекс «антиген + антитело»), который выглядит как белые снежинки. У каждой из тест-систем (МРП, RPR) имеются свои технические особенности, однако принцип метода одинаков.
Исследуемый материал Плазма или сыворотка, используемые для анализа, должны быть прозрачными. Для тестирования не подходит хилезный или гемолизированный материал.
- Получение плазмы из капиллярной крови: кровь из пальца берут аналогично методике
определения СОЭ. В пипетку Панченко набирается 5% раствор цитрата натрия до отметки «К», а затем выливается обратно в бутылочку до отметки на пипетке «25». Оставшийся цитрат натрия сливается в пробирку для центрифуги, куда добавляют три пипетки крови из пальца пациента, набранной до отметки «К», и перемешивают. Кровь оставляют при комнатной температуре до разделения плазмы и эритроцитов. Чтобы ускорить процесс, кровь можно центрифугировать. Полученную плазму забирают пипеткой Пастера или специальной пипеткой и используют для диагностики. Для получения плазмы рекомендуется применять специальные микроветы. Материал необходимо доставить в лабораторию в течение 4-6 часов.
- Получение инактивированной сыворотки: сыворотку собирают либо при ее отделении от сгустка при отстаивании крови, либо путем центрифугирования стерильно взятой крови из вены. В холодильнике сыворотку можно хранить при температуре 4°С до 5 дней. В лаборатории полученная сыворотка инактивируется при температуре +5б°С в течение 30 мин. Тестирование выполняется на прозрачных полистироловых пластинах с углублением (МРП) или на специальных картонных пластинах (RPR).
Оценка результатов
Результаты МРП читают в проходящем свете на черной основе или над световым источником невооруженным глазом или с помощью лупы. В углублениях, где находится плазма или сыворотка больного сифилисом в различных количествах образуются белые хлопья разного размера. Если в углублении отмечаются большие хлопья или их конгломераты, и окружающая жидкость становится прозрачной, результат считается положительным (4+, 3+). Мелкие хлопья - результат слабо положительный (2+, 1+). В отрицательном случае хлопья не образуются (негативный). В сомнительных случаях (+-) следует ориентироваться по «отрицательному контролю». Если в углублении отрицательного контроля хлопья не образуются, результат оценивается как сомнительный (+-). Исследование продолжается количественным методом, путем разбавления сыворотки, поскольку необходимо исключить так называемый феномен «прозоны>, когда в неразведенном образце плазмы или сыворотке преципитат не образуется, а при его разведении возникают хлопья.
Для проведения RPR-теста используются готовые к употреблению сертифицированные реагиновые комплексы.
Количественный метод МРП, RPR используется для определения количества антител в образце исследуемой сыворотки во время и после лечения.
Возможные ошибки
Неправильное взятие крови из пальца - в капилляре находятся пузырьки, неточно фиксируется отметка на капилляре.
1. В реакции отсутствует контрольная сыворотка (также слабо положительной).
2. В готовой эмульсии неравномерная концентрация антигена по причине недостаточного перемешивания перед применением.
3. Бактериальное инфицирование рабочего раствора.
4. Несоблюдение правил хранения и изготовления плазмы, сыворотки, антигенов и их рабочего раствора.
5. Использование двухвалентного цитрата натрия вместо трехвалентного.
6. Нарушение правил использования посуды, пипеток, несоблюдение порядка исследования.
Несоблюдение упомянутых правил может давать как ложноотрицательные, так и ложноположительные результаты.

Специфические (трепонемные) тесты

С помощью специфических тестов в сыворотке больного сифилисом обнаруживаются антитела, образованные в организме к специфическим антигенам Treponema pallidum. Трепонемные тесты используются для постановки и подтверждения диагноза, а также в дифференциальной диагностике. Для специфических тестов характерны большая чувствительность и высокоспецифичные результаты. Механизмы специфических тестов не одинаковы, с их помощью можно обнаружить различные антитела, поэтому показания к их использованию различаются. Назначая эти исследования, врач должен понимать сущность каждого теста, уметь обосновать свой выбор, ориентироваться в разнообразных тестах, чтобы выбрать оптимальный вариант для постановки диагноза и соответствующего лечения, а также сделать заключение о его результатах.
К трепонемным тестам, наиболее часто используемым в диагностике относятся РПГА и И ФА.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРНА)

Принцип метода
Syphilis TPHA-Test (Treponema pallidum haemagglutination test) - реакция непрямой гемагглютинации, которую используют для выявления специфических антител к Treponema pallidum. Эритроциты барана или петуха сенсибилизируются антигеном Treponema pallidum. В присутствии антител происходит агглютинация сенсибилизированных клеток - в микролунках образуются специфические рисунки. Клеточная суспензия содержит также трепонемный экстракт Рейтера, который абсорбирует непатогенные трепонемные антитела.
Исследуемый материал
Исследуется только сыворотка. Не подходят гемолизированные и мутные образцы. Образцы можно хранить 24 часа от +2 до + 8°С, или до 4 недель при температуре - 20°С.
Характеристика метода РПГА - хороший диагностический тест, однако положительные результаты необходимо подтверждать с помощью какого-либо другого специфического теста диагностики сифилиса. В случае излеченного сифилиса результаты РПГА могут длительно оставаться положительными. Ложноположительные результаты наблюдаются в случае лепры, инфекционного мононуклеоза, а также в случае заболеваний соединительной ткани. Результаты читают через 45-60 минут.
Интерпретация результатов
Результаты оцениваются по системе «4+». - Отрицательный результат определяется тогда, когда в центре лунки с сывороткой для теста образуется ясная и четкая точка из неагглютинированных клеток с/или без очень маленького просвета в центре. Сомнительный результат определяется тогда, когда в центре точки из неагглютинированных клеток вместо маленького просвета появляется кольцо небольшой плотности на прозрачном фоне. Такие образцы необходимо тщательно проверить повторно (+/-, «1+» - сомнительный). Положительный результат определяется в том случае, когда клетки агглютинируют, образуя подобный поляне участок, вокруг которого формируется кольцо. В зависимости от его величины результат реакции оценивается соответственно «2+», «3+» или «4+».
Если в контрольной лунке теста наблюдается точка неагглютинирующих клеток, это значит, что сыворотка пригодна к тестированию.
Если в контрольной лунке теста произошла реакция, это значит, что в исследуемом образце содержатся неспецифические агглютинины. Сыворотка для тестирования непригодна и ее необходимо тщательно обработать.

Количественный метод РПГА

Для контроля эффективности лечения можно использовать количественный метод РПГА - определение титра антител. Титрование рекомендуется выполнять при резко положительных пробах, которые оценены как «4+», так как результат «4+» бывает в том случае, если титр пробы > 1:80.
Интерпретация результатов
Если в контрольной лунке гемагглютинация не происходит, то наблюдаемая гемагглютинация в лунках теста свидетельствует, что проба положительная. Титр определяется по последнему разведению, которое указывает на результат <4+»:
1. разведение в лунке 1:80
2. разведение в лунке 1:160
3. разведение в лунке 1:320 и т. д. Титровать результаты «3+» или «2+» нет необходимости.
Для исследования каждой пробы необходимо использовать также положительные и отрицательные контрольные сыворотки РПГА. Отрицательная контрольная сыворотка всегда демонстрирует выраженную точку, положительная контрольная сыворотка - гемагглютинацию «4+».
Для РПГА характерна высокая чувствительность, с ее помощью можно обнаружить очень небольшое количество антител в сыворотке. Тест после лечения негативируется очень медленно, он может показывать слабоположительные результаты многие годы после выздоровления.

Тесты иммуноферментного анализа - ИФА

Тест принадлежит к иммуноферментным тестам, которые в последнее время широко используются в мире для диагностики различных инфекционных заболеваний. В диагностику сифилиса ИФА начали внедрять в 80-е годы, когда были разработаны и сертифицированы диагностические тесты и стандартизирована методика тестирования.
В основе теста лежит непрямой метод Кунса. В сыворотке больного обнаруживаются специфические антитела. По чувствительности и специфичности тест сравним с иммунофлуоресцентными тестами. С помощью ИФА-теста можно выявить антитела всех существенных классов (IgM, IgA, IgG). Особенно ценен ИФА-тест в ранней диагностике сифилиса, поскольку он становится положительным уже в конце инкубационного периода. ИФА-тест является идеальным методом диагностики, подходящим для одновременного исследования большого числа образцов. Его рекомендуется использовать при обследовании беременных, контактных лиц, доноров и представителей групп риска. ИФА используется также как подтверждающий тест для образцов, демонстрирующих положительные результаты при использовании различных неспецифических тестов и РПГА.
Серологическую диагностику сифилиса затрудняют присутствие в крови ревматоидного фактора, других антител и перекрестные реакции с другими родственными бактериями, например, Treponema phagedenis и Borrelia burgdorferi. При использовании ИФА-теста эти факторы практически не влияют на результаты. Высокая концентрация липидов, гемолиз пробы не являются препятствиями для тестирования, как в случае большинства других тестов.
ИФА-тест позволяет определять все существенные классы антител и показывает высокую степень чувствительности на всех стадиях болезни (чувствительность теста 97-98%, специфичность - 98,5-99%). Отрицательный результат ИФА исключает сифилитическую инфекцию с большой степенью вероятности. В последние годы созданы тест-системы для определения отдельных классов антитрепонемных антител IgM-ИФА, IgG-ИФА. ИФА может оставаться положительным долгие годы даже у пролеченных пациентов, поэтому не используется как критерий выздоровления. У ИФА-тестов не наблюдается феномен «прозоны», который дает ложноотрицательные результаты при других методах тестирования, так как титр специфических антител очень высокий.
Принцип метода
1. АГ осаждают на лунках полистиролового
планшета.
2. Добавляют исследуемую сыворотку, образуется комплекс «АГ+АТ».
3. Добавляют антитела к иммуноглобулинам человека, меченные энзимом.
4. Добавляют субстрат, изменяющий цвет, и по интенсивности окраски определяют активность энзима. Цвет раствора зависит от количества антител в исследуемой пробе.
С помощью этого метода можно определить антитела IgG и IgM вместе, а также антитела класса IgM отдельно. Результаты расцениваются как «положительные» или «отрицательные».

Тесты, подтверждающие диагноз сифилиса

Иммунофлюоресцентные тесты - РИФ (FTA)
К этой группе относятся: РИФ-200, РИФ-абс (FTA-abc), IgM РИФ абс (IgM FTA-abc), РИФ ликв.
Начиная с 60-х годов XX столетия для подтверждения и дифференциальной диагностики сифилиса широко используются чувствительные и специфические иммунофлюоресцентные тесты. Антитела-иммунофлюоресцины, определяемые с помощью таких тестов, раньше всего появляются в сыворотке, поэтому тест становится положительным к концу первой недели после инфицирования. Это позволяет диагностировать сифилис, когда другие тесты (кроме ИФА) остаются отрицательными. РИФ-абс при первичном серонегативном сифилисе является положительной в 87% случаях в конце второй и начале третьей недели после появления первичного аффекта. Чтобы уменьшить количество ложноположительных результатов (РИФ-абс - 2,8-3%), рекомендуется использовать комплекс реакций - РИФ-абс + РИФ-200. Ложноположительные результаты при РИФ-200 наблюдаются примерно в 2% случаев. В случае вторичного сифилиса РИФ-абс положительна в 100%, в случае поздней формы заболевания - в 92-100%, в случае специфического поражения внутренних органов - в 94-100%. Даже после лечения сифилиса РИФ-абс очень долго дает положительные результаты, поэтому она не применяется для определения эффективности лечения, если только не используется количественный метод РИФ-абс - определение титра антител.
В последние годы все чаще используется реакция IgM РИФ-абс. В сыворотке больного IgM антитела появляются раньше остальных. Этот тест применяется в ранней диагностике, при обследовании контактных лиц, для контроля эффективности лечения, в дифференциальной диагностике рецидива и реинфекции, а также в случае врожденного сифилиса или для определения присутствия материнских антител у новорожденных.
Как известно, из-за большой молекулярной массы IgM антитела не проникают сквозь плацентарный барьер. В крови матери (больной сифилисом) циркулируют преимущественно IgG антитела, для которых плацентарный барьер не является препятствием, и которые поступают в кровяное русло ребенка. При наличии в сыворотке новоровденного IgM антител, нужно думать о заражении сифилисом. В мире до сих пор нет единого мнения о длительности циркуляции IgM антител в сыворотке больного. Большинство авторов считает, что они достигают своего максимума на 6-9 неделе, и не обнаруживаются после 18-месячного возраста. Немецкий ученый Миллер предполагает, что IgM циркулируют до исчезновения клинических симптомов, О"Нил - что IgM циркулируют в крови до 5 лет. По данным Миллера, в 60% случаев Syphilis lateens praecox IgM в сыворотке больше не обнаруживаются. Если лечение начинается рано, IgM исчезают в течение 5-6 месяцев, если лечение начинается позже - они сохраняются в течение 1-2 лет. Некоторые авторы используют реакцию IgM РИФ-абс как критерий излеченности.
Принцип метода
Исследуемая сыворотка подвергается инкубации вместе с Treponema pallidum (антиген), которая фиксируется на предметном стекле. В случае положительного результата образуется комплекс «антитело + антиген», связанный с обработанными флюоресцеинами антителами к человеческим глобулинам. Перед началом тестирования исследуемую сыворотку обрабатывают сорбентом (непатогенный экстракт Treponema Reiteri), чтобы исключить реакцию связывания неспецифических антител.
В результате получают свечение иммунных комплексов различной интенсивности, которую определяют с помощью люминесцентного микроскопа.
Оценка результатов
Исследование выполняется с помощью люминесцентного микроскопа (ртутно-кварцевая лампа с иммерсионной системой, окуляр с 4-х или 5-кратным увеличением, фильтры в зависимости от марки микроскопа). Результаты
оцениваются по интенсивности свечения иммунных комплексов.
Положительно оцениваются препараты, которые дают свечение 4+, 3+, 2+. Желто-зеленая люминесценция оценивается как 4+, ярко-зеленое свечение - 3+, бледно-зеленое свечение - 2+. При выраженности свечения 1+ реакция считается отрицательной (в препарате наблюдается фоновое окрашивание или окрашивание отсутствует - определяются только тени). Результат «2+» необходимо проконтролировать с помощью других специфических тестов.

Реакция иммобилизации бледных трепонем - РИБТ

Этот тест для диагностики сифилиса разработали в 1949 г. и предложили использовать Р. Нельсон и М. Майер. Даже в наши дни этот тест считается наиболее эффективным в диагностике сифилиса и служит эталоном в наиболее сложных случаях. РИБТ практически не дает ложноположительных результатов. В качестве антигена используется суспензия живых, вирулентных трепонем, полученных из яичек кролика через 7-9 дней после интратестикулярного заражения. Тест технически сложен, требует специально подготовленного персонала и проводится только в специализированных лабораториях. В основе метода лежит феномен, при котором образовавшийся комплекс «антиген + антитело» фиксируется на трепонемах, делая их неподвижными. Необходимо помнить, что антитела-иммобилизины появляются в сыворотке больного относительно поздно, поэтому при первичном и вторичном свежем сифилисе тест слабоположительный или отрицательный. Однако он незаменим при диагностике латентных форм сифилиса, сифилиса внутренних органов, нейросифилиса. После проведения терапии тест негативируется медленно и поэтому не используется для оценки эффективности лечения. Тест может оставаться положительным долгие годы после завершения терапии, в связи с чем используется для ретроспективной диагностики сифилиса.
Получение и обработка исследуемой сыворотки
Перед постановкой РИБТ обследуемому пациенту запрещается употреблять антибиотики. После употребления бициллина кровь для исследования на РИБТ берут не ранее, чем через месяц.
Кровь берут из вены натощак в стерильную, сухую, химически чистую пробирку или вакутейнер. Сыворотку необходимо отделить от сгустка в стерильных условиях не позднее чем через 24 часа после взятия крови. Перед исследованием сыворотку следует инактивировать при температуре 5б°С в течение 30 мин. Если одну и ту же сыворотку необходимо исследовать повторно, она инактивируется при температуре 5б°С в течение 15 мин.
Сыворотку можно хранить в холодильнике при температуре 10°С не более 15 дней. Добавление в сыворотку каких-либо консервантов недопустимо!
Вся используемая для проведения реакции посуда (пипетки, пробирки, флаконы и др.) должна быть стерильна.Тестирование проводится в стерильном боксе.
Интерпретация результатов
В темном поле зрения микроскопа определяют число неподвижных трепонем в исследуемом и контрольном препарате, выражая число неподвижных трепонем в процентах.
РИБТ считается отрицательной, если иммобилизация составляет 0-20%; сомнительной - при 21-30%, слабоположительной - при 31-50% и положительной, если иммобилизация превышает 50%. Сыворотки, давшие сомнительный или слабоположительный результат, рекомендуется исследовать повторно. Также желательно повторно провести исследование в тех случаях, когда полученные результаты РИБТ полностью не совпадают с результами других стандартных тестов для диагностики сифилиса. Такие исследуемые сыворотки заслуживают особого внимания, так как результаты РИБТ различны при подтверждении или исключении диагноза сифилиса.

Лечение сифилиса

Длительность лечения и применяемые методы
на разных стадиях сифилиса различны.
Схемы лечения больных сифилисом в разные периоды:

Превентивное лечение

- Бензатина бензилпенициллин G либо Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м однократно или
- Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 2 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 7 дней или
Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 7 или Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 7 дней.

Лечение больных первичным сифилисом

- Бензатина бензилпенициллин G по 2,4 млн. ЕД в/м 1 раз в 7 дней № 2 или
- Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м один раз в 5 дней № 3 или
- Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 5 или
- Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 10 или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 10 дней или
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 10 дней.

Лечение больных вторичным и ранним скрытым сифилисом

- Бензатина бензилпенициллин G по 2,4 млн. ЕД в/м один раз в 7 дней № 3 или Бициллин-1 по 2,4 млн. ЕД в/м 1 раз в 5 дней № 6 или
Бициллин-3 по 1,8 млн. ЕД либо Бициллин-5 по 1,5 млн. ЕД в/м два раза в неделю № 10 или Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 20 дней или
Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 20 дней. У больных с давностью заболевания более 6 месяцев рекомендуется использовать бензилпенициллина новокаиновую соль, прокаин бензилпенициллин либо бензилпенициллина натриевую соль кристаллическую.

Лечение больных третичным, скрытым поздним и скрытым неуточненным сифилисом

Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 28 дней, через две недели - второй курс лечения бензилпенициллина натриевой солью кристаллической в аналогичных дозах либо одним из препаратов средней дюрантности (бензилпенициллина новокаиновая соль, прокаин бензилпенициллин) в течение 14 дней или
Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20, через две недели - второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе № 10 или Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней.

Лечение больных с поражением внутренних органов и опорно-двигательного аппарата

Лечение больных висцеральным сифилисом рекомендовано проводить в условиях стационара - дерматовенерологического или терапевтического с учетом тяжести поражения. Лечение проводится дерматовенерологом совместно с терапевтом, назначающим сопутствующую и симптоматическую терапию.
Лечение больных ранним висцеральным сифилисом
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 1 млн. ЕД в/м каждые 6 часов (4 раза в сутки) ежедневно в течение 20 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 20 дней или
Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно № 20.
Лечение больных поздним висцеральным сифилисом
Лечение начинается с двухнедельной подготовки антибиотиками широкого спектра действия (тетрациклин, эритромицин, доксициклин). Затем переходят к пенициллинотерапии.
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 400 тыс. ЕД в/м каждые 3 часа (8 раз в сутки) ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в той же дозе в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль по 600 тыс. ЕД в/м два раза в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Прокаин бензилпенициллин по 1,2 млн. ЕД в/м один раз в сутки ежедневно в течение 28 дней, через 2 недели - второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе в течение 14 дней.

Лечение больных нейросифилисом

Лечение больных ранним нейросифилисом
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 10 млн. ЕД в/в капельно два раза в сутки ежедневно в течение 14 дней. Разовую дозу антибиотика разводят в 400 мл изотонического раствора натрия хлорида и вводят в/в в течение 1,5-2 ч. (растворы используются сразу после приготовления) или
Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 2-4 млн. ЕД в/в струйно 6 раз в сутки ежедневно (суточная доза 12-24 млн. ЕД) в течение 14 дней. Разовую дозу антибиотика разводят в 10 мл изотонического раствора натрия хлорида и вводят в/в медленно в течение 3-5 минут в локтевую вену.
Для предотвращения реакции обострения (в виде появления или усугубления неврологической симптоматики) в первые 3 дня пенициллинотерапии можно принимать преднизолон в суточной дозе 50-60 мг (однократно утром).
Через 6 месяцев после окончания лечения проводится контрольное исследование ликвора. При отсутствии его санации курс лечения рекомендуется повторить.
Лечение больных поздним нейросифилисом
Лечение больных поздним нейросифилисом (прогрессирующим параличом, спинной сухоткой) проводится по тем же методикам, которые рекомендованы для лечения больных ранним нейросифилисом. Различие состоит в проведении двух курсов лечения вместо одного, с последующим ликворологическим контролем через 6 месяцев. При отсутствии санации ликвора проводится еще один курс лечения.
При прогрессирующем параличе и спинной сухотке наилучший эффект терапии, как правило, состоит в отсутствии прогрессирования заболевания.
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 10 млн. ЕД в/в капельно два раза в сутки ежедневно в течение 14 дней, через две недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая по 2-4 млн. ЕД в/в струйно 6 раз в сутки ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней. У больных прогрессирующим параличом для предотвращения обострения психотической симптоматики на фоне специфического лечения в начале терапии показано использование преднизолона.

Лечение сифилиса при указании на непереносимость препаратов пенициллина

При наличии аллергических реакций на пенициллин используются препараты резерва:
- Доксициклин по 0,1 г per os 2 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней - для лечения первичного и 30 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Тетрациклин по 0,5 г per os 4 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней - для лечения первичного и 30 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Эритромицин по 0,5 г per os 4 раза в сутки ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 15 дней - для лечения первичного и 30 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Оксациллина натриевая соль или ампициллина натриевая соль по 1 млн. ЕД в/м 4 раза в сутки (каждые 6 часов) ежедневно в течение 10 дней для превентивного лечения, 14 дней - для лечения первичного и 28 дней - для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса или
- Цефтриаксон по 0,5 г в/м один раз в сутки ежедневно № 5 для превентивного лечения и № 10 - для лечения первичного сифилиса; по 1,0 г в/м один раз в сутки ежедневно № 20 для лечения вторичного и раннего скрытого сифилиса.

Лечение нейросифилиса при указании на непереносимость препаратов пенициллина

Одним из предпочтительных препаратов резерва при нейросифилисе является доксициклин, который применяется перорально по 0,1 г 3 раза в день.
Тетрациклин и эритромицин при нейросифилисе применять не рекомендуется, так как они плохо проникают через гематоэнцефалический барьер.
Полусинтетические пенициллины - оксациллин или ампициллин - вводятся внутримышечно по 1 млн. ЕД на инъекцию (доза разводится в 5-6 мл дистиллированной воды) 4 раза в сутки. Длительность лечения - 28 дней.
Цефтриаксон хорошо проникает в органы, ткани и жидкости организма, в частности - в спинномозговую. Кроме того, он обладает высокой трепонемоцидной активностью. При раннем нейросифилисе цефтриаксон назначается по 1,0-2,0 г в/м один раз в сутки ежедневно в течение 20 дней. В тяжелых случаях (сифилитический менингоэнцефалит, острый генерализованный менингит) возможно внутривенное применение препарата и увеличение суточной дозы до 4,0. Для лечения поздних форм нейросифилиса цефтриаксон назначается по 1,0 г в/м один раза в сутки ежедневно в течение 20 дней, через 2 недели - второй курс препарата в аналогичной дозе ежедневно в течение 10 дней.

Дополнительное лечение

Дополнительное лечение показано, если:
- через год после полноценного лечения ранних форм сифилиса не произошло 4-х кратного снижения титра MP (RPR);
- имеет место замедленная негативация серологических реакций в течение двух лет без тенденции к дальнейшему снижению титров/степени позитивности теста или
- клинический/серологический рецидив. Проводится однократно или двукратно. Предпочтительно применение: Бензилпенициллина натриевой соли кристаллической по 1 млн. ЕД в/м каждые 4 часа (6 раз в сутки) ежедневно в течение 20 дней или
- Цефтриаксона по 1,0 г в/м один раз в сутки ежедневно в течение 20 дней.

Лечение детей

Специфическое лечение детей, больных ранним врожденным сифилисом
- Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая из расчета 100 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на 6 инъекций (каждые 4 часа), ежедневно в течение 14 дней или
- Прокаин бензилпенициллин из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м один раз в сутки ежедневно в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на две инъекции (каждые 12 часов), ежедневно в течение 14 дней.
Специфическое лечение детей, больных поздним врожденным сифилисом
Бензилпенициллина натриевая соль кристаллическая из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы
тела в сутки в/м, разделенных на 6 инъекций (каждые 4 часа), ежедневно в течение 28 дней; через две недели - второй курс бензилпенициллина натриевой соли кристаллической в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Прокаин бензилпенициллин из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м один раз в сутки ежедневно в течение 28 дней, через две недели - второй курс прокаин бензилпенициллина в аналогичной дозе в течение 14 дней или
- Бензилпенициллина новокаиновая соль из расчета 50 тыс. ЕД/кг массы тела в сутки в/м, разделенных на две инъекции (каждые 12 часов), в течение 28 дней; через две недели - второй курс бензилпенициллина новокаиновой соли в аналогичной дозе в течение 14 дней.

Профилактические мероприятия при сифилисе

Антенатальная профилактика
1. Коррекция полового поведения.
2. Полноценное обследование беременных: сбор анамнеза, клиническое и серологическое исследование в первой и второй половине беременности.
3. Своевременная диагностика и лечение сифилиса у беременных.
Постнатальная профилактика
1. Тщательное обследование новорожденного (до 3-х месячного возраста).
2. Профилактическая терапия - если женщина заранее не получала полноценного лечения, не стоит на учете или не получала профилактику во время беременности.

Диагностика сифилиса представляет собой комплекс мероприятий, которые проводятся для того, чтобы установить, присутствует ли в организме человека возбудитель заболевания, на какой стадии формирования находится болезнь, чтобы решить как именно её необходимо лечить.

Обнаружить и уточнить такое заболевание самостоятельно полностью достоверно невозможно – сам больной может только выявить у себя признаки формирования сифилиса, например, твёрдый шанкр, сыпь, лимфоаденопатию. Возможны и случаи, когда сифилис протекает бессимптомно. Поэтому первичное обнаружение болезни происходит, чаще всего, двумя способами – во время профилактического осмотра, если человек не ощущает у себя никаких проявлений наличия трепонемы в организме, либо посредством осуществления специфических анализов и обследований.

Следом за обнаружением клинических признаков сифилиса происходит определение и постановка диагноза. Каким образом это происходит? Доктор производит осмотр и опрос пациента, выясняет, на что именно он жалуется, а далее назначает ему проведение лабораторных обследований и анализов.

В первую очередь, больному необходимо будет сдать общие и биохимические анализы крови и мочи, так как их показатели, например, повышенное значение лейкоцитов или СОЭ, дают медику понять, что у пациента есть проблемы со здоровьем. Далее ему назначаются специфические тесты по методам обнаружения трепонемы, а также методикам серологической диагностики.

Что представляют собой способы обнаружения трепонемы

После того, как доктор соберёт анамнез больного и проведёт первичный осмотр ротовой полости, половых органов, кожных и слизистых покровов, у него появляется базовая информация по поводу состояния обратившегося к нему пациента, однако этого недостаточно для постановки точного диагноза.

Среди методик обнаружения наличия бледной трепонемы в организме – темнопольная микроскопия, метод полимеразной цепной реакции, а также прямой реакции иммунофлюоресценции.

Микроскопические исследования, или темнопольная микроскопия. Для выявления микроорганизмов во взятом материале, его микроскопия проводится в тёмном поле. Использование этого метода объясняется тем фактом, что некоторые бактерии плохо поддаются окрашиванию или вовсе не окрашиваются специальными красителями. К тому же, изучение материала в тёмном поле даёт возможность изучить состояние живых бактерий, а так как темнопольная микроскопия не требует окрашивания, она отличается более низкой стоимостью и занимает меньше времени для проведения.

Для анализа отбирается содержимое кожных сифилитических образований – язв, папул, эрозий, в некоторых случаях – материал из периферических лимфоузлов.

Что может показать такой анализ? Обнаружение в биологическом материале движущихся бледных трепонем в любом количестве является доказательством наличия у обследуемого сифилиса. Отличить бледную трепонему от других, непатогенных спирохет, можно по количеству завитков.

Следует отметить, что такой метод является единственным объективным способом определить диагноз “сифилис”, если речь идёт о ранних, свежих, первичных формах, когда серологические анализы дают негативные результаты. Особенно ценны его показания при диагностировании нейросифилиса и состояния реинфекции.

Как производится забор материала? Эрозия или папула сначала обрабатываются антисептическим средством – так место отбора жидкости готовится к вмешательству медика. После этого на её поверхность производится надавливание тупым скальпелем – таким образом медик добивается выделения тканевого сока прозрачного жёлтого цвета. Кроме того, может осуществляться соскоб или взятие мазка со слизистых. Срок годности полученного материала достаточно мал, поэтому анализ должен осуществляться сразу после его забора .

По результатам исследования у больного можно диагностировать первичный или вторичный сифилис, а также ранний врождённый сифилис у ребёнка.

Положительные результаты рассматриваются как достоверное основание для определения заболевания. Если у человека не выявлены трепонемы, процедуру повторяют до трёх раз, до этого применяя к ране компрессы с физиологическим раствором.

Если есть подозрение на третичный сифилис, или сочетание сифилиса с онкологическими новообразованиями, темнопольное микроскопирование сочетается с окрашиванием по методу Романовского-Гимзе, или серебрением по Морозову.

Метод ПИФ. Отличается большей безопасностью для проводящего его персонала, чем темнопольное исследование. Трепонемы в мазках при этом зафиксированы, они не обязательно должны быть живыми, поэтому осуществлять такое обследование можно в любое время после отбора материала.

Для изучения у больного отбирается содержимое жидкости, отделяемой сифилидами, или тканевые срезы с областей кожных проявлений сифилиса, лимфатических узлов. Чувствительность метода составляет до 95%.

Метод ПЦР. С помощью полимеразной цепной реакции, результат обследования можно получить уже через несколько часов после забора материала. Его чувствительность достигает 98,6%.

Однако, несмотря на кажущиеся преимущества, методика практически не используется в России и Украине, так как его чувствительно и специфичность недостаточно хорошо изучена в сравнении с прямыми методами диагностики. ПЦР-скрининг используют как дополнительный способ диагностирования врождённого сифилиса, нейросифилиса, а также при затруднении диагностики сифилиса у ВИЧ-больных.

Изучение сыворотки крови таким способом неэффективно, для ПЦР отбирают содержимое сифилидов.

Серологические методики диагностирования

Серологическая диагностика назначается пациентам для подтверждения сифилиса, для выявления скрытого сифилиса, для контроля эффективности назначенного лечения, а также в профилактических целях.

Суть серологических реакций заключается в выявлении и вычислении иммунной реакции организма на попадание возбудителя болезни, и определении так называемых маркеров сифилиса.

На сегодняшний день, наиболее изученными антигенами к бледной трепонеме являются:

• протеиновые;
• антигены полисахаридной природы;
• липидные антигены.

Иммунный ответ организма производится посредством выработки клеточного (макрофагов и Т-лимфоцитов) и гуморального иммунитета (специфических иммуноглобулинов). При этом выработка антител к сифилису происходит по общему правилу – сначала появляются IgM, далее – IgG (суммарные антитела). Возможно также выделение антител классов IgA, IgE, IgG.

Сифилитические антитела могут быть специфическими и неспецифическими, направленными против аутоантигенов, а также против липидных антигенов трепонемы.

Именно серологические анализы дают возможность выявить наличие и концентрацию, а также тип выработанных к возбудителю антител. Все проводимые анализы делятся на несколько общих групп:

• липидные;
• групповые трепонемные;
• видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции.

Наиболее часто медиками назначаются:

• иммуноферментные анализы;
• реакции пассивной гемагглютинации;
• реакции микропреципитации.

Иммуноферментная проба. Это лабораторное обследование основывается на высокой специфичности иммунологических реакций типа “антиген-тело”. ИФА имеет несколько модификаций, одна из которых – ELISA, или твердофазный гетерогенный иммунный анализ. Такая разновидность анализа назначается для определения присутствия антигенов классов А, М, G к возбудителю сифилиса. В основе диагностики лежит иммунная реакция антигена и антитела, а также учёт присоединения ферментной метки к антителам. Для изучения используется сыворотка крови больного материал берут из вены. Первая реакция происходит между Ig At и очищенным антигеном возбудителя Ag, который фиксируется к поверхности лунок иммунологического планшета.

Следующая иммунологическая реакция позволяет выявить связавшийся специфический иммуноглобулин, а также антитела к нему – конъюгат Ig At, отмеченный пероксидазой.

В зависимости от концентрации иммуноглобулинов в материале окраска может быть более или менее интенсивной. После завершения реакций, медики производят фотометрирование лунок и подсчёт результатов.

Для серодиагностики в этом случае используются полистирольные планшеты с 96 лунками. На их стенке заранее адсорбируются антигены. Далее исследуемая сыворотка вводится в ячейки, а гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Оставшиеся антитела удаляются смыванием. Следующий шаг – внесение в лунки меченных ферментами антител против иммуноглобулинов. Если в изучаемой сыворотке крови есть определяемые антитела, они сработают как антигены, с которыми прореагируют меченые антитела.

После промывки в сыворотку вносится краситель, который позволяет визуализировать и учесть реакцию по интенсивности окрашивания. Концентрация антител в единице объёма подсчитывается по изменению оптической плотности жидкости в конкретной ячейке.

Реакция ИФА в комплексе с другими реакциями позволяет определить наличие антител к сифилису, вирусным гепатитам, ВИЧ-инфекции, хламидиям, цитомегаловирусу. Для первичной диагностики сифилиса её назначают вместе с реакцией микропреципитации, однако при этом следует помнить, что обнаружение антител в крови свидетельствует только о контакте обследуемого с возбудителем в прошлом или настоящем. Результат можно получить уже через несколько суток.

Изучая результаты, а именно класс выявленных антител, медик может определить стадию инфекционного процесса. При этом такие данные, как количество выявленных антител, к сожалению, не имеет значения для установления точного диагноза или выработки тактики лечения.

Методика ИФА, чаще всего, применяется как анализ, подтверждающий тест на сифилис, в то время как в качестве контрольной проверки для определения излечения от болезни его не делают.

Реакция пассивной гемагглютинации. Один из видов отборочных реакций. У не леченых и ранее лечившихся больных в ранних и поздних стадиях заболевания отмечается самая высокая чувствительность и наиболее точный результат – до 99,6% .

Его недостатком является тот факт, что реакция может давать отрицательные результаты только в небольшом количестве случаев, поэтому она не является адекватным методом контроля лечения. Однако среди всех методик диагностики сифилиса именно РПГА является наиболее часто применяемой микробиологической реакцией – она отличается простотой, высокой чувствительностью и дешевизной. Кроме того, в процессе можно использовать антиген Рейтера.

В чем заключается суть РПГА? Она основывается на выявлении агглютинации эритроцитов, на поверхности которых зафиксированы антигены бледной трепонемы. При этом агглютинация происходит только при наличии антитрепонемных антител. Впервые эта идея появилась в 1965 году, и с тех пор активно применяется для серодиагностики сифилиса.

Реакция назначается для подтверждения любой стадии заболевания. При условии совмещения её с тестом ОРС, нет необходимости проводить больному комплекс серологических реакций. Самостоятельно такой анализ не применяется, его ценность можно определить только в сочетании с ОРС и РИФ.

Единственный минус этого способа диагностики – необходимость ждать некоторое время после предполагаемого заражения, так как в первые 4 недели после контакта с больным отрицательный результат анализа будет сомнительным. При первичной стадии болезни, реакция показывает низкие титры (до 1:320), во время вторичной титры реакции возрастают. При скрытом сифилисе титры снова снижаются.

Следует отметить, что после перенесённой болезни реакция РПГА остаётся положительной на всю жизнь, поэтому такой результат в качестве контроля качества лечения считается ложноположительным.

Материал, который подлежит изучению в данном случае – кровь, взятая из вены человека. В среднем, объективный результат можно получить уже на следующий день после сдачи анализа.

Реакция микропреципитации. Производится с кардиолипиновым антигеном, другое название – RPR или РМП, относится к нетрепонемным тестам. Заключается в определении реагенов – антител типа M и G, которые образуются в ответ на антигены липидного происхождения, полученные в ответ на повреждение здоровых клеток возбудителем сифилиса.

Реакция назначается как первичное обследование на сифилис, в порядке медицинских осмотров и контроля результативности лечения.

Скрининговый тест способен определить наличие антифосфолипидных антител, и его можно назвать более прогрессивной заменой RW, которая ещё называется реакцией Вассермана. Анализ может определить в сыворотке крови наличие антител, появляющихся спустя 3-5 недель после заражения, то есть примерно спустя 10 дней после появления первого шанкра, до этого срока результат реакции может быть ложным. Кроме крови из пальца или вены, исследованию может подвергаться спинно-мозговая жидкость, которая берётся посредством проведения пункции.

В 78% случаев первичного сифилиса тест будет положительным, вероятность определения наличия вторичной формы заболевания значительно выше – до 97%.

Если RPR показывает положительный результат, доктор назначает последующие анализы – ИФА, РПГА, РИФ, чтобы проверить, не является ли он ложным. Одна из причин, почему результат может показать положительные значения, не соответствующие действительности – наличие в крови антител к фосфолипидам.

В процессе проведения анализа фиксируется агглютинация липидных частиц с холестерином и кардиолипином. Антитела к фосфолипидам подсоединяются к кардиолипину, вызывая их агглютинацию. У больных сифилисом осуществляется аналогичная реакция – у таких пациентов ложноположительный тест проверяется отрицательным результатом специфических анализов на сифилис, которые проводятся для выявления антител к трепонемным антигенам. Ложноположительная реакция может быть результатом присутствия в организме некоторых аутоиммунных заболеваний, например, системной красной волчанки. Транзиторно-положительная реакция определяется у беременных с мононуклеозом, малярией, ветряной оспой, туберкулёзом, хламидиозом.

По окончанию успешного лечения реакция RPR становится отрицательной у 90% пациентов.

Как происходит диагностика с назначением микропреципитации? Сначала пациенту проводится отборочная реакция RPR, или любая её модификация в количественном и качественном варианте. Если анализ положительный, далее больному назначается любой специфический трепонемный тест в качестве дифференциальной диагностики заражения именно сифилисом.

По завершению лечения пациенту проводится реакция МР, а по снижению полученного титра лечащий врач может отследить динамику выздоровления и эффективности терапии. Если результаты показывают уменьшение показаний титров в 4 и более раз за год, лечение считается эффективным.

Расшифровка результатов: ложные, ошибочные, ложноположительные, ложноотрицательные

Почему при появлении первых же признаков и симптомов сифилиса следует сразу обратиться к доктору? Дело в том, что даже если самостоятельно сдать анализы в ближайшей лаборатории, правильно расшифровать их показатели может только квалифицированный .

Любые типы серологических тестов назначаются обычно как экспресс-диагностика, или при прохождении медосмотров. Их результаты могут быть отрицательными, слабоположительными, если концентрация антител не достигает определённого уровня, или положительными. Кроме того, каждый тип анализа может быть ложноположительным или ложноотрицательным. Положительные реакции нетрепонемных тестов обычно проверяются результатами специфических трепонемных.

Трепонемные серологические обследования также могут быть отрицательными, сомнительными, слабоположительными или положительными. Например, иммуноблоттинг назначается с целью подтвердить или опровергнуть результаты первичного обследования. Выявление антител типа IgG и IgM в крови отмечается полосками.

Если и неспецифический первичный скрининг, и специфическая серологическая реакция показывает отрицательный результат, значит, человек здоров, либо заражение произошло менее 10 дней назад.

Положительная реакция у беременных также может присутствовать при нетрепонемном скрининге, однако если далее был проведён иммуноблоттинг-тест, и он дал отрицательный результат, это означает отсутствие заболевания.

Может ли ошибка закрасться в результаты теста? Всегда существует некоторая вероятность, что анализ показал ошибочные результаты. Поэтому в процессе диагностирования доктор должен обращать внимание и на внешние факторы, которые не зависят от пациента.

Ложноположительные тесты могут появляться, если у человека присутствует:

• сахарный диабет;
• алкогольное или наркотическое опьянение;
• корь, мононуклеоз, гепатит;
• болезни сердца;
• опухоль любого типа;
• беременность;
• аутоиммунное заболевание.

Большинство типов тестов могут выявить присутствие болезни, но только если она достигла определённой стадии развития. Например, RW покажет наличие заражения со 100-процентной вероятностью, но только спустя месяц после попадания возбудителя в организм. Третичный сифилис отображается в результатах RW с вероятностью до 75%.

Ранние стадии более целесообразно диагностировать посредством осуществления ИФА-тестов. Если у человека отсутствуют другие заболевания, его достоверность стремится к 96%.

Отрицательный показатель может свидетельствовать об отсутствии заболевания. Сомнительный результат – причина для назначения повторного обследования. Если у пациента обнаружены антитела к сифилису, это не повод для паники – квалифицированное и вовремя подобранное лечение может справиться с болезнью, если она присутствует, без каких-либо опасных последствий.

Кресты, прочерки и плюсы в расшифровке анализа: как понимать

Результаты некоторых серологических тестов могут выдаваться в виде таблицы, где в колонках указываются кресты или прочерки. Как происходит расшифровка такого результата?
Так, например, МР или реакция микропреципитации рассчитывается в цифровом эквиваленте, показывая количественный титр инфекции.

RW (реакция Вассермана) подразумевает получение показателей теста в виде:

• прочерка (отрицательный тест);
• одного или двух крестов (слабоположительный);
• трёх крестов (положительный);
• четырёх крестов (резко положительный тест).

Наличие даже одного креста в результатах – основание для назначения следующих анализов уточняющего характера. Прочерк в таблице не гарантирует абсолютно точного отсутствия болезни.

Результаты РИФ также обозначаются в виде плюсиков или крестов – от одного до четырёх. Если у человека показан прочерк (минус) – значит, сифилис отсутствует. Результаты в виде одного, двух, 3 крестов или 4 “плюсиков” говорят о наличии болезни.

РПГА не даёт никаких количественных ассоциаций в результате – он показывает либо полное отсутствие болезни, или её присутствие в прошлом или настоящем.

Результаты ИФА расшифровать более сложно. Они представлены в виде таблицы классов антител IgA, IgM и IgG. Возле каждого значения стоит прочерк либо крест. Сопоставляя наличие или отсутствие конкретного типа антител, лечащий врач может сделать вывод о стадии болезни, давности заражения.

После проведения комплексного обследования на сифилис, доктор сводит все полученные результаты в единую расширенную таблицу, пользуясь методикой плюсов и минусов. Проставляя кресты и прочерки в зависимости от того, был ли результат конкретного анализа положительным или отрицательным, лечащий врач может составить картину заболевания.

Требования по подготовке к сдаче анализов

Как готовиться к предполагаемому тесту на сифилис? Забор материала для исследования может проводиться из вены или пальца, если речь идёт об анализе крови. Соблюдение специальной диеты для этого не требуется, но сам забор крови производится натощак – кушать нельзя как минимум за 4 часа до процедуры, а в некоторых случаях следует не есть за 12 часов перед взятием материала.

Если пациенту предстоит сдача материала для выявления ДНК трепонемы, её нужно проводить до начала терапии антибиотиками.

Сбор спинномозговой жидкости проводится только в стационаре. Нет никаких ограничений в питании или образе жизни до назначенной процедуры.

Так же просто сдаются соскобы с поверхности глаза. Что касается мазков и соскобов с кожи, главные требования – не пользоваться никакими местными косметическими или медицинскими средствами до изъятия материала.

Снятие соскоба и мазка из половых органов требует более тщательной подготовки, например, чтобы пациент за 3 суток до назначенной процедуры воздерживался от интимных контактов, диагностических медицинских манипуляций. Кроме того, женщинам нельзя делать спринцевание или пользоваться вагинальными свечами и таблетками.

Экспресс-тесты на сифилис: можно ли диагностировать болезнь самостоятельно

Современная медицинская наука шагнула настолько далеко вперёд, что сегодня существуют даже экспресс-тесты для определения наличия сифилиса в домашних условиях.

Тест для домашнего обследования человека на наличие сифилиса позволяет определить, есть ли заражение организма.

В аптеках можно приобрести специальный набор для самоанализа, например, для обследования слюны или крови. В качестве подготовки к подобной процедуре нужно следовать всем описанным в инструкции требованиям. Если производится анализ крови, перед процедурой нельзя кушать в течение минимум 5 часов.

Наборы для самостоятельного анализа крови предполагают взятия всего 1-2 капель крови через небольшой прокол в коже. Его делают с помощью специального устройства со стерильным острым наконечником или иглой. В течение нескольких минут прибор может определить присутствие антигена в крови.

Некоторые наборы предлагают устройства только для взятия материала на исследование, который далее нужно направить в лабораторию для исследования. Следует отметить, что отобранный материал годен для обследования в течение короткого срока – если не доставить его в лабораторию в этот же день, результат нельзя будет считать действительным.

В любом случае, при наличии подозрения на сифилис нужно как можно быстрее обратиться к доктору, даже если тесты в домашних условиях показали отрицательный результат.

Диагностика сифилиса включает в себя целый комплекс мероприятий, в котором центральная роль отведена, безусловно, специальным анализам и тестам. У больного могут отбирать спинномозговую жидкость, кровь из вены или пальца, мазки и соскобы с кожи и слизистых, тканевую жидкость из ран и повреждений покровов, с целью обнаружить как самих возбудителей болезни, так и антитела к ним.

В целом, диагностика сифилиса основывается на анализе клинико-лабораторных данных. Диагноз устанавливается специалистом!

Специальность: инфекционист, гастроэнтеролог, пульмонолог .

Общий стаж: 35 лет .

Образование: 1975-1982, 1ММИ, сан-гиг, высшая квалификация, врач-инфекционист .

Научная степень: врач высшей категории, кандидат медицинских наук.

Среди венерических заболеваний занимает первые позиции по распространенности. Заболевание передается от больного к здоровому преимущественно половым путем. Диагностика сифилиса – сложный, поэтапный процесс, который не всегда приносит результат.

Подозрение на сифилис – к какому врачу идти?

Большое распространение заболевание получило потому, что многие молодые люди просто не знают, как определить сифилис, какие обследования необходимо пройти. Лечением половых инфекций занимаются врачи венерологи или дерматовенерологи, так как в большинстве случаев подобные инфекции сопровождаются повреждением кожных покровов. Медики советуют с профилактической целью обследоваться каждому пациенту репродуктивного возраста. Болезнь часто протекает в скрытой форме, поэтому выявить ее можно не всегда.

Методы диагностики сифилиса

Диагностические мероприятия по выявлению заболевания основываются на клинических и лабораторных данных. Диагноз «сифилис» ставится только после получения положительных результатов лабораторного исследования. Ранняя диагностика сифилиса исключает прогрессирование заболевания. Первичный сифилис определяется исследованием отделяемого твердого шанкра эрозивных папул. Среди основных методов лабораторной диагностики сифилиса необходимо выделить:

1. Бактериоскопию.
2. Серологическое исследование (специфическое и неспецифическое).
3. Гистологию (при ).
4. Микроскопию (исследование нативного препарата, отделяемого эрозивных или язвенных высыпаний, пунктата из лимфоузла).

Микробиологическая диагностика сифилиса

Основу данного типа обследования составляет бактериоскопический метод диагностики сифилиса. Он предполагает обнаружение T.pallidum в материале, забранном из очагов воспаления:

• твердый шанкр;
• эрозивные нарушения;
• лимфоузлы;
• спинной мозг.

Предварительно врач протирает место забора материала тампоном с физраствором, затем раздражает поверхность эрозии специальной петлей, пока из нее не покажется тканевая жидкость.

При этом избегают смешивания материала с кровью. Жидкость помещается на предметное стекло. Препарат, полученный таким способом, исследуется с помощью микроскопа. Методы микробиологической диагностики сифилиса основываются на обнаружении возбудителя в материале. При отрицательном результате исследование проводят несколько дней подряд для полного исключения болезни.

Серологическая диагностика сифилиса

Для выявления и подтверждения диагноза «сифилис» в случае поздних и скрытых форм болезней основы диагностики составляет серологический метод. В большинстве случаев для диагностики сифилиса используют . Метод предполагает исследование венозной крови пациентов, которые обнаруживают антитела к антигенам возбудителя. Такой анализ на бледную трепонему помогает выявить заболевание даже при отсутствии явных клинических симптомов.

В зависимости от состава используемых для диагностики веществ, серологические методы подразделяют на:

1. Специфические (трепонемные).
2. Неспецифические (нетрепонемные).

Трепонемные тесты

Трепонемные тесты – это метод диагностики, использующий в качестве основы специфические антигены Treponemapallidum. Метод используется как для постановки, так и для подтверждения диагноза, для дифференциальной диагностики сифилиса. Все специфические тесты имеют высокую чувствительность и точные результаты. Механизмы проведения специфических тестов неодинаковы, поэтому они имеют различные показания к применению. К трепонемным тестам относят следующие методы лабораторной диагностики сифилиса:

1. Реакцию связывания комплемента (реакция Вассермана, РВ) с трепонемным антигеном – РСКт.
2. Реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ.
3. Реакцию иммунофлюоресценции – РИФ. Применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс; РИФц – реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью или спинномозговой жидкостью.
4. Реакцию пассивной гемагглютинации – РПГА.
5. – ИФА.
6. Иммуноблотинг.

Нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты на сифилис используются в качестве отборочных и не подходят для окончательной диагностики, выставления диагноза. Они активно применяются для обследования больших групп населения с целью профилактических осмотров при возникновении неблагоприятной эпидемиологической ситуации. Тест обладает простотой проведения, имеет высокую чувствительность. Результат диагностики оценивается врачом. Чувствительность неспецифических тестов при ранних формах заболевания составляет около 70 %, а при вторичном сифилисе – 100 %.

К нетрепонемным тестам диагностики сифилиса относятся:

1. RPR (RapidPlasmaReagins).
2. Тест с инактивированной сывороткой – МРП (микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном).

Данные флокуляционные тесты характеризуются простотой оценки. В ходе реакции образуется комплекс «антиген + антитело», который формирует хлопья, различимые с помощью увеличительного стекла. Роль антигена в тесте выполняет кардиолипиновый антиген, который получают из сердечной мышцы быка. Связь с антигенами возбудителя сифилиса при этом отсутствует, поэтому тесты и получили название нетрепонемные.

Экспресс-диагностика сифилиса

Современные методы диагностики сифилиса предполагают выявление заболевания на ранних стадиях. В качестве метода экспресс-диагностики используется RapidPlasmaReagin(RPR). Тест направлен на определение концентрации в крови антител к возбудителю сифилиса. При заражении бледная трепонема в организме формирует защитные антитела IgG и IgM. Наличие их в образце забранной крови является косвенным доказательством присутствия в организме бледной трепонемы. Данная диагностика сифилиса помогает установить точный срок продолжительности заболевания, время инфицирования.

Анализы на сифилис – расшифровка

Современная лабораторная диагностика сифилиса основывается следующих методах:

• нетрепонемный тест – RPR или VDRL;
• трепонемные тесты – РИФ и РПГА.

В странах СНГ для диагностики сифилиса чаще применяют реакцию Вассермана, также реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ. Оценку полученных результатов производит только врач, который учитывает клинические проявления заболевания, стадию патологии, состояние пациента. С примерными результатами исследований можно ознакомиться в таблице ниже.ото

Дифференциальная диагностика сифилиса

Когда у врача после первичного осмотра возникает подозрение на сифилис, он направляет пациента для сдачи крови на RV. Если результаты исследования подтвердили наличие бледной трепонемы в организме, проводится дифференциальная диагностика с определением стадии заболевания. При первичном сифилисе чаще бывают положительными РИФ и ИФА, однако это не позволяет выставить диагноз «сифилис».

Диагностика вторичного сифилиса не вызывает затруднений – резким положительным является результат по всем серологическим реакциям. РИБТ положительна больше чем у 50 % больных. Третичная форма сифилиса практически не вызывает затруднений. Серологические реакции положительные в 50–90 % случаев. Диагностика скрытого серопозитивного сифилиса основывается на серологических реакциях с подтверждением результата с помощью РИБТ.

Непрямые методы диагностики сифилиса.

Для диагностики сифилиса применяется множество методов исследования, различающихся по технике проведения и предназначению. Прямые методы направлены на обнаружение возбудителя в исследуемом материале с помощью микроскопии (микроскопия в темном поле и др.) или ПЦР.

Помимо методов прямой детекции бледной трепонемы (T. pallidum), при обследовании на сифилис широкое применение получили непрямые (серологические ) методы исследования, выявляющие антитела к возбудителю сифилиса в сыворотке крови и цереброспинальной жидкости. К непрямым методам диагностики сифилиса относятся серологические реакции ИФА, РПГА, КСР, РИФ и РИФ-абс, РИБТ, ПЦР, экспресс-метод, иммуноблот и другие.

Серологические методы диагностики инфекционных заболеваний.

Серологические критерии диагностики основаны на специфических реакциях "антиген-антитело". Реагируют антигены (компоненты клеточных стенок, жгутиков, капсул, ДНК и токсинов) тех микроорганизмов, которые необходимо определить, с антителами , содержащимися в сыворотках. Между антигенами и соответствующими им антителами происходит связывание, что и положено в основу методов серологической диагностики. Серологические реакции применяются для определения неизвестного антигена (источником которого является бактерия, вирус, токсин и др.) с помощью известного антитела или для определения антитела в сыворотке с помощью известного антигена.

Серологические реакции классифицируют в зависимости от состояния антигена и особенностей среды, в которой взаимодействуют антиген и антитело, а также по способу проведения.

Для проведения серологических реакций испольуют множество лабораторных методов, таких, как агглютинация, преципитация, связывание комплемента, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный анализ и другие. Эти реакции позволяют эффективно проводить предварительную идентификацию микроорганизмов.

Сыворотки, которые необходимы для постановки серологических реакций, получают экспериментальным путем, в частности, их производят институты вакцин и сывороток, и предлагают в составе коммерческих диагностических наборов.

Серологические методы являются важным инструментом в диагностике и лечении инфекционных заболеваний человека и животных, поскольку с их помощью можно не только идентифицировать возбудителя заболевания, но и обнаружить в крови больных и переболевших специфические антитела к соответствующим возбудителям. Серологические методы в настоящее время являются самыми эффективными методами диагностики при невозможности или трудностях выделения возбудителя, и сравнительно редко дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты.

Использование серологических методов для диагностики сифилиса

В основе серологических лабораторных методов диагностики сифилиса лежит способность организма давать иммунный ответ на появление возбудителя. С помощью серологических реакций в сыворотке (плазме) крови (или цереброспинальной жидкости) выявляют следы иммунного ответа на заражение, а именно антитела к антигенам бледной трепонемы, или же сами антигены.

Для того, чтобы установить специфический характер имеющихся клинических проявлений (т.е. что они являются следствием именно сифилиса) и, в дальнейшем, контролировать динамику патологического процесса, предложено большое количество серологических методов исследований. Эти же методы также широко применяют для скрининга населения.

В соответствии с действующими национальными руководствами и клиническими методическими рекомендациями, во многих странах мира при обследованиях населения с целью выявления больных сифилисом и при установлении клинического диагноза используются передовые серологические методы. Их применяют как при наличии клинических признаков болезни у пациентов, так и в латентные периоды.

Постановка серологических реакций - один из наиболее надежных методов диагностики сифилиса. Стандартизованные серологические реакции с регламентированной методикой постановки называются серологическими тестами на сифилис. Учитывая то, что почти все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными или ложноотрицательными , их следует ставить в комплексе и, при необходимости, в динамике.

Серологические реакции, которые используются для определения антител в сыворотке крови больного, отличаются друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Помимо классических методов, для эффективной серодиагностики сифилиса используются иммунологические тесты и технологии, получившие в 21 веке новый импульс к развитию.

Антитела выявляются различными иммунохимическими (серологическими) методами, среди которых осадочные реакции, иммуноферментный, иммунохемилюминесцентный, иммунохроматографический анализы, линейный иммуноблоттинг, исследование с применением проточной флюорометрии, технология иммуночипов и другие.

Серодиагностика (исследование с помощью серологических методов) применяется для:

• подтверждения клинического диагноза сифилиса,
• постановки диагноза скрытого сифилиса,
• контроля за эффективностью лечения, как один из критериев излеченности больных сифилисом,
• профилактики сифилиса (скрининговое обследование определенных групп населения с целью выявления патологии).

Важнейшие свойства, необходимые серологическим тестам - чувствительность, специфичность, воспроизводимость

Решающим критерием при выборе метода лабораторной диагностики является его эффективность - чувствительность, специфичность и воспроизводимость.

Чувствительность - это доля положительных результатов у больных. Чувствительность метода определяется процентом положительных результатов исследования проб, заведомо содержащих специфические маркеры возбудителя (нпр., антигены возбудителя или антитела к ним).

Специфичность - доля отрицательных результатов теста у здоровых пациентов. Специфичность метода определяется процентом отрицательных результатов исследования проб, заведомо не содержащих специфические маркеры возбудителя. Таким образом, чем выше чувствительность и специфичность, тем надежнее и достовернее метод исследования.

К важным диагностическим критериям также относится воспроизводимость результатов при повторных исследованиях одних и тех же проб. Следует отметить, что, несмотря на значительные достижения в области высоких технологий, не существует методов, обеспечивающих 100% (абсолютную) чувствительность и специфичность во всех исследуемых биопробах.

В настоящее время в России официально регистрируются тест-системы, наборы, ингредиенты, обладающие при постановке реакции менее 95% чувствительностью и специфичностью. Таким образом, всегда существует возможность получения неадекватного результата.

Классификация тестов по типу применяемого антигена. Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис

В современной венерологии для диагностических целей используется более десятка вариантов серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить по разным критериям на различные категории. Классификацию проводят по методологии проведения исследований, области применения, скорости, дешевизне, требованиям к лабораторной оснащенности и т.д.

Трепонемные реакции теоретически более специфичны, однако они также дают ложноположительные результаты. Более того, они не позволяют дифференцировать нелеченный и излеченный сифилис. Результаты трепонемных реакций будут положительными в обоих случаях. Нетрепонемные реакции позволяют различать нелеченную или недавно перенесенную и излеченную инфекцию.

При обследовании рекомендуется проводить и трепонемную, и нетрепонемную реакции. Для установки и подтверждения диагноза "сифилис" требуются положительные результаты при проведении тестов обоих типов - трепонемных и нетрепонемных. Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами, и проводятся до начала, в процессе и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

1. Нетрепонемные тесты

Наиболее известные из нетрепонемных тестов с визуальной расшифровкой результатов - это

• RW - реакция Вассермана с липидными антигенами (реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, РСКк)
• реакция Канна (не используется в настоящее время),
• цитохолевая реакция Закс-Витебского (не используется в настоящее время),
• микрореакция преципитации с плазмой или инактивированной сывороткой (МРП или РМП),
• RPR (тест быстрых плазменных реагинов, Rapid Plasma reagin),
• TRUST (тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой, Toluidin Red Unheated Serum Test).

Среди нетрепонемных тестов имеются 2 теста с микроскопическим считыванием результатов реакции:

1. VDRL - (Venereal Disease Research Laboratory);

2. USR - тест определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins).

Реактивность в нетрепонемных тестах обычно указывает на повреждение тканей и не всегда специфична в отношении сифилиса. Простота выполнения и низкая стоимость позволяет использовать их как отборочные реакции при установлении предварительного диагноза сифилиса.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются специфические антигены трепонем. Эти тесты обязательны для подтверждения диагноза (РПГА, РИТ, РИФ и ИФА). Они являются более сложными и дорогостоящими, чем тесты 1-й группы, но и более специфичными и чувствительными. Выявление антител в спинно-мозговой жидкости также производится с помощью трепонемных тестов.

Традиционные трепонемные реакции, подтверждающие диагноз сифилиса, требуют дорогого лабораторного оборудования и опытного персонала, поэтому они редко проводятся вне специализированных лабораторий. Однако сейчас их можно заменить простыми и быстрыми трепонемными реакциями, которые возможно проводить на местах и в которых используется цельная кровь. Проведение этих реакций не требует длительного обучения, специальных условий для хранения реактивов и оборудования.

Сравнительная дешевизна, удобство и практичность трепонемных экспресс- реакций привлекают к ним внимание не только как к методам подтверждения диагноза. Эти реакции могут применяться для скрининга сифилиса в рамках оказания первичной медицинской помощи (их можно проводить на местах, в том же лечебно-профилактическом учреждении) или в районах, где лаборатории не доступны. Однако поскольку антитела к T. pallidum определяются на протяжении ряда лет независимо от того, лечился больной или нет, трепонемные экспресс-реакции нельзя использовать для оценки эффективности лечения и дифференциальной диагностики нелеченного и излеченного сифилиса.

Классификация серологических методов диагностики сифилиса по типу определяемых антител

В современной дерматовенерологии для диагностики используются различные серологические реакции на сифилис. Часть методов, которые были актуальны ещё десять лет назад, перестают применяться из-за сложности или недостаточной специфичности. В зависимости от выявляемых антител, методы серологической диагностики сифилиса подразделяются на три группы:

I. Липидные (реагиновые) реакции - определяются антитела к липидным антигенам (реагинам):

1) флокуляционные: микрореакция на стекле с липидными антигенами -экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации - МРП), VDRL, CMF (cardiolipin microflocculation test), RPR и др.;

2) реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами: реакция Вассермана (РВ), качественная и количественная методика постановки, термостатная и на холоде (реакция Колмера);

3) осадочные реакции, которые в настоящее время не используются: реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса - Витебского и др.;

II. Групповые трепонемные реакции - определяются антитела к групповым трепонемным антигенам (входящим в состав микробной клетки как патогенных, так и сапрофитных трепонем):

1) РСК с протеиновым антигеном Рейтера;

2) реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

3) реакция иммунного прилипания (РИП).

III. Видоспецифичные протеиновые трепонемные реакции - определяются антитела к специфическим видовым антигенам Treponema pallidum:

1) реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ);

2) реакция иммунофлюоресценции РИФ-абс и ее варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS, и др.);

3) реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА) и её модификация TPPA.

4) иммуноферментный анализ (ИФА);

5) иммуноблотинг.

Практическое использование серологических реакций на сифилис

Различные серологические реакции используются для разных практических целей.

За рубежом при массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются нетрепонемные отборочные реакции (VDRL, RPR и др.). Для постановки диагноза требуется подтверждение в трепонемных тестах РИФ-Абс (FTA-ABS), РПГА или TPPA. В настоящее время, рекомендуется использовать ИФА, как замену VDRL в скрининговых тестах. Это связано с тем, что тест ИФА отличается чувствительностью, специфичностью, возможностью автоматизировать исследования, а также с разработкой диагностических тест-наборов. Кроме того, обосновывается реверсивная схема порядка исследования на сифилис, когда первыми используются трепонемные тесты.

С целью контроля за эффективностью терапии и для оценки активности инфекции рекомендуют VDRL в количественном исполнении. В качестве подтвердающего/дополнительного теста используется тест ИФА на противотрепонемные антитела IgM.

В отечественной практике используют комплекс серологических реакций (КСР), включающий реакцию микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном и РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами. В последнее время рекомендуется в КСР заменять РСК на ИФА или РПГА. Также используются РИФ (и ее модификации - РИФ-Абс и остальные), РИБТ.

РИБТ применяют в качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций.

Подходы к лабораторной серологической диагностике сифилиса в Российской Федерации

Внедрение в практику унифицированных методов клинических лабораторных исследований в СССР и Российской Федерации позволило ввести более прогрессивные диагностические методы, упорядочить работу клинико-диагностических лабораторий, повысить производительность труда, сократить дублирование лабораторных исследований и стало основой для разработки рациональных форм готовых наборов реактивов.

В 1985 году в СССР, в целях совершенствования диагностики сифилиса, нетрепонемная реакция РСК с неспецифическим (вассермановским) антигеном и осадочные реакции (цитохолевая и Кана) были исключены из диагностического комплекса, как менее чувствительные и не дающие дополнительной информации.

Вместо них, в составе комплекса серологических реакций на сифилис (КСР), было предусмотрено применение реакции связывания комплемента с трепонемным и кардиолипиновым антигенами (РСКт) и микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном (РМП). Более высокая чувствительность и информативность этого комплекса реакций обеспечивала выявление не только реагинов, но и противотрепонемных антител.

1985 год

1. РМП с кардиолипиновым антигеном с плазмой крови и инактивированной сывороткой крови. Отборочный тест в случае изолированного применения.

2. РСК с трепонемным и кардиолипидовым антигенами; качественная и количественная методики постановки, термостатная и на холоде;

3. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ); пробирочная и меланжерная методики постановки;

4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в следующих модификациях: РИФ с абсорбцией (РИФ-абс) с сывороткой крови и капиллярной кровью, РИФ-200, РИФ с цельной спинномозговой жидкостью (РИФ-ц); качественные и количественные методики постановки. Диагностика скрытых и поздних форм сифилиса, распознавание ЛПР (ложно-положительных результатов)

5. Комплекс классических серологических реакций (КСР): РСК (реакции Вассермана) с кардиолипиновым и трепонемным антигенами + РМП. Профилактическое обследование населения на сифилис, диагностика всех форм сифилиса, контроль эффективности лечения, обследование лиц, контактных по сифилису.

В 2001 году Минздравом РФ был утвержден новый нормативный документ, регламентирующий порядок проведения диагностических тестов - приказ Министерства Здравоохранения РФ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» .

С целью совершенствования лабораторной диагностики сифилиса, повышения качества работы и предупреждения дальнейшего распространения заболеваемости сифилисом рекомендовано заменить РСК в комплексе серореакций (КСР) при диагностике сифилиса на ИФА и РПГА в качестве отборочных и подтверждающих тестов, т.к. эти тест-системы являются высокочувствительными, специфическими и воспроизводимыми.

Приказ №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» предусматривает применение для серо- и ликвородиагностики сифилиса в России следующих методов:

1. РМП и зарубежные аналоги (VDRL, RPR и аналогичные микрореакции) в качестве отборочных тестов при обследовании населения на сифилис. Постановка РМП осуществляется с плазмой или инактивированной сывороткой крови.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Диагностические реакции, в том числе для ликвородиагностики. В связи с простотой постановки и наличием коммерческих тест-систем могут использоваться как отборочные тесты.
3. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем. Отборочные и диагностические реакции.
4. Качественный и количественный варианты РИФ (РИФ-абс, РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца). Антиген - патогенная бледная трепонема штамма Никольса.
5. Комплекс серологических реакций (КСР) на сифилис, состоящий из реакции связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами, и РМП. Возможно заменить реакцию связывания комплемента на ИФА или РПГА также в сочетании с РМП. КСР относится к диагностическим тестам.
6. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса. РИБТ относятся к диагностическим подтверждающим тестам.

Таким образом, последовательность обследования пациентов на сифилис в учреждениях здравоохранения рекомендуется планировать следующим образом:

1. При первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или ее модификации (RPR, TRUST, VDRL) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата - любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ);

2. После окончания терапии ставится РМП или ее модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года.

Прием по предварительной записи! Суббота, воскресенье.